PCR實(shí)驗(yàn)室的壓差設(shè)置對(duì)于防止交叉污染至關(guān)重要。通常,PCR實(shí)驗(yàn)室分為四個(gè)區(qū)域:試劑配制區(qū)、樣品處理區(qū)、核酸擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)。這些區(qū)域應(yīng)保持相對(duì)獨(dú)立,不能互通,且需遵循嚴(yán)格的單向流程,即只能從試劑配制區(qū)到樣品處理區(qū),再到核酸擴(kuò)增區(qū),最后到產(chǎn)物分析區(qū)。
壓差設(shè)置上,一般遵循以下原則:
· 試劑配制區(qū):設(shè)為微正壓區(qū)域,通常設(shè)定為正壓,如+15Pa,以防止外部空氣進(jìn)入造成污染。
· 樣品處理區(qū):同樣設(shè)為微正壓區(qū)域,但壓力略低于試劑配制區(qū),如+10Pa或+5Pa,以防止含核酸的氣溶膠從試劑配制區(qū)進(jìn)入。
· 核酸擴(kuò)增區(qū)與產(chǎn)物分析區(qū):設(shè)為微負(fù)壓區(qū)域,如-5Pa至-20Pa,以防止含核酸的氣溶膠擴(kuò)散出去污染試劑與樣品。
緩沖間的壓差設(shè)置也至關(guān)重要,以確保實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外空氣的有效隔離。常見(jiàn)的緩沖間壓差設(shè)置方式包括:
· 所有緩沖間相對(duì)于區(qū)域房間內(nèi)外,自身保持正壓或負(fù)壓狀態(tài)。
· 緩沖間與實(shí)驗(yàn)區(qū)保持一致的壓力梯度。