組合形式PCR實(shí)驗(yàn)室
所謂組合形式PCR實(shí)驗(yàn)室, 是指完成PCR四個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程的實(shí)驗(yàn)用房相鄰布置,組成獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)域的形式。對(duì)于組合形式PCR實(shí)驗(yàn)室,由于各個(gè)實(shí)驗(yàn)間集中布置,容易造成相互干擾,因此,對(duì)總體布局設(shè)計(jì)以及屏障系統(tǒng)具有一定的要求。各室在入口處設(shè)緩沖間,以減少室內(nèi)外空氣交換。試劑配制室及樣品處理室宜呈微正壓,以防外界含核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入,造成污染;核酸擴(kuò)增室及產(chǎn)物分析室應(yīng)呈微負(fù)壓,以防含核酸的氣溶膠擴(kuò)散出去污染試劑與樣品。
PCR
實(shí)驗(yàn)室建設(shè)一般結(jié)構(gòu):
一、主體結(jié)構(gòu)
主體為彩鋼板、鋁合金型材。
實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于主要通過(guò)呼吸途徑使人傳染上嚴(yán)重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素,通常已有預(yù)防傳染的疫苗。室內(nèi)所有陰角、陽(yáng)角均采用鋁合金50內(nèi)圓角鋁,從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問(wèn)題。結(jié)構(gòu)牢固,線條簡(jiǎn)明,美觀大方,密封性好。
二、標(biāo)準(zhǔn)的三區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié)
將PCR過(guò)程分成試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本制備和PCR擴(kuò)增檢測(cè)三個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)區(qū)。整個(gè)區(qū)域有一個(gè)整體緩沖走廊。每個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū), 同時(shí)各區(qū)通過(guò)(tōng guò)氣壓調(diào)節(jié),使整個(gè)PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程中試劑和標(biāo)本免受氣溶膠的感染并降低擴(kuò)增產(chǎn)物對(duì)人員和環(huán)境的污染。
可打開(kāi)緩沖區(qū)Ⅰ,緩沖區(qū)Ⅱ和 PCR 擴(kuò)增區(qū)的排風(fēng)扇往外排氣,在實(shí)驗(yàn)區(qū)的外墻上和各扇門上都安裝有風(fēng)量可調(diào)的回風(fēng)口,空氣通過(guò)回風(fēng)口向室內(nèi)換氣。
三、消毒
在三個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)和三個(gè)緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈,供消毒用。
實(shí)驗(yàn)室家具按歸屬可分為三類:第一類是從屬于大學(xué)或者是由大學(xué)代管的實(shí)驗(yàn)室;第二類實(shí)驗(yàn)室屬于國(guó)家機(jī)構(gòu),有的甚至是國(guó)際機(jī)構(gòu);第三類實(shí)驗(yàn)室直接歸屬于工業(yè)企業(yè)部門,為工業(yè)技術(shù)的開(kāi)發(fā)與研究服務(wù)。 在試劑準(zhǔn)備(ready)區(qū)和標(biāo)本制備區(qū) 還設(shè)置移動(dòng)紫外線燈,對(duì)實(shí)驗(yàn)桌進(jìn)行局部消毒。
四、機(jī)械連鎖不銹鋼(不銹耐酸鋼)傳遞窗
試劑和標(biāo)本通過(guò)機(jī)械連鎖不銹鋼(不建議使用電子連鎖方式)傳遞窗傳遞,保證試劑和標(biāo)本在傳遞過(guò)程中不受污染(人物分流)。
五、地面
地面建議使用聚氯乙烯(Polyvinyl chloride)卷材地面或自流坪地面,整體性好。便于進(jìn)行清掃,耐腐蝕。沒(méi)有條件的也可采用水磨石地面,或大塊的瓷磚(至少800mm×800mm)接縫需要小于2mm。
六、照明
燈具要選用凈化燈具,能達(dá)到便于清洗、不積塵的特點(diǎn)。
實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于主要通過(guò)呼吸途徑使人傳染上嚴(yán)重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素,通常已有預(yù)防傳染的疫苗。
PCR實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域儀器設(shè)備配置標(biāo)準(zhǔn):
(1)試劑貯存和準(zhǔn)備(ready)區(qū) 2~8℃和-15℃冰箱:混勻器;微量加樣器(覆蓋(Cover)1~1000μl);移動(dòng)紫外燈(近工作臺(tái)面);消耗品:一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心);專用工作服和工作鞋;專用辦公用品等。
(2)標(biāo)本制備區(qū) 2~8℃冰箱,-20℃或-80℃冰箱;高速臺(tái)式冷凍離心機(jī);混勻器;水浴箱或加熱模塊;微量加樣器(覆蓋1~1000μl);可移動(dòng)紫外燈(近工作臺(tái)面);超凈工作臺(tái),消耗品;一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心);專用工作服和工作鞋;專用辦公用品等。
(3)擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)核酸擴(kuò)增儀;微量加樣器(覆蓋1~1000μl);可移動(dòng)紫外燈(近工作臺(tái)面);消耗品:一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心);專用工作服和工作鞋;專用辦公用品等。
(4)擴(kuò)增產(chǎn)物分析(Analyse)區(qū)視檢測(cè)方法不同而定?;緝x器設(shè)備設(shè)備如下:微量加樣器(覆蓋1~200μl);可移動(dòng)紫外燈(近工作臺(tái)面);消耗品:一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心);專用工作服和工作鞋;專用辦公用品等。